Transwell實(shí)驗(yàn)的步驟

本文主要介紹4種Transwell實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟，具體包括：Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、Transwell上皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、TranswellB16細(xì)胞的體外遷移實(shí)驗(yàn)、Transwell內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1遷移實(shí)驗(yàn)。一、Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)過(guò)程與Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。由于沒(méi)有基質(zhì)膠的阻擋，細(xì)胞穿過(guò)膜的速度較侵襲實(shí)驗(yàn)明顯加快，所以細(xì)胞量要更大。我做侵襲實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞密度是1×10°，而遷移實(shí)驗(yàn)的密度是1×10°...

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重組蛋白表達(dá)技術(shù)要點(diǎn)

大腸桿菌（E.coli）表達(dá)重組蛋白的技術(shù)經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，已經(jīng)成為一個(gè)非常成熟表達(dá)系統(tǒng)。為了在大腸桿菌表達(dá)體系中獲得可溶以高表達(dá)產(chǎn)量的蛋白，一個(gè)優(yōu)秀的表達(dá)策略是重要的。為了高效表達(dá)有活性蛋白，一般需考慮以下幾個(gè)因素：1.宿主體系的選擇細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、絲狀真菌和單細(xì)胞藻類均可以作為表達(dá)宿主，每一種表達(dá)宿主都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。如果需要表達(dá)的蛋白具有真核的翻譯后修飾（糖基化修飾），那么可以選擇酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞等，而大腸桿菌等原核表達(dá)體系則不適用。大腸桿菌作為表達(dá)外源蛋白廣...

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凝膠電泳的染色方法

凝膠電泳是研究蛋白質(zhì)性質(zhì)的一種相對(duì)簡(jiǎn)單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的主要工具。通過(guò)電泳分離蛋白質(zhì)是基于這樣一個(gè)事實(shí)，即帶電分子將在施加電場(chǎng)時(shí)通過(guò)基質(zhì)遷移。蛋白質(zhì)電泳分離的基質(zhì)是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學(xué)試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過(guò)硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個(gè)交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡(luò)。這種孔隙網(wǎng)絡(luò)允許小蛋白質(zhì)分子快速通過(guò)，同時(shí)減緩較大蛋白質(zhì)的...

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Vero細(xì)胞無(wú)血清懸浮培養(yǎng)技術(shù)驗(yàn)證

大多數(shù)用于抗體生產(chǎn)的細(xì)胞主要基于動(dòng)物細(xì)胞上的開(kāi)發(fā)，如MRC-5人二倍體細(xì)胞、Vero猿猴腎上皮細(xì)胞、Madin-Darby犬腎(MDCK)細(xì)胞和雞胚成纖維細(xì)胞。尤其是來(lái)自非洲綠猴腎臟的Vero細(xì)胞已被廣泛用于vaccine生產(chǎn)，因?yàn)樗鼈儽籛HO機(jī)構(gòu)證明沒(méi)有致癌潛力。許多vaccine，例如針對(duì)基孔肯雅熱、登革熱、日本腦炎、病毒性胃腸炎、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病、羅斯河熱、嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥、天花、西尼羅河腦炎和流感的vaccine都是使用Vero細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)開(kāi)發(fā)的。用于viru...

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一文了解細(xì)菌內(nèi)毒素

內(nèi)毒素(Endotoxin)是一種脂多糖(LPS)，來(lái)源于革蘭氏陰性細(xì)菌外膜，其細(xì)胞壁外膜的外部脂質(zhì)成分由內(nèi)毒素分子組成，細(xì)胞死亡或分解后被釋放出來(lái)。LPS具有三個(gè)結(jié)構(gòu)，由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質(zhì)A三部分構(gòu)成。內(nèi)毒素單體分子量為10kDa左右，在不同成分水溶液中，可形成大分子聚集體，大的可超過(guò)1000kDa。類脂A是內(nèi)毒素多種生物活性或毒性反應(yīng)的主要基團(tuán)。該基團(tuán)沒(méi)有種屬特異性,所以各屬細(xì)菌的類脂A結(jié)構(gòu)相似,其毒性反應(yīng)相似，如發(fā)熱、血液流動(dòng)力學(xué)改變、彌漫性血管內(nèi)凝...

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