為什么要進(jìn)行進(jìn)行細(xì)胞系STR鑒定

據(jù)統(tǒng)計(jì)約30%細(xì)胞系被交叉污染或錯(cuò)誤辨識(shí)，只因使用了交叉污染或錯(cuò)誤辨識(shí)的細(xì)胞而導(dǎo)致研究結(jié)論錯(cuò)誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細(xì)胞治療災(zāi)難性后果……，這將浪費(fèi)大量時(shí)間、精力和金錢(qián)。世人皆知，細(xì)胞身嬌體貴難養(yǎng)活，養(yǎng)好細(xì)胞實(shí)屬不易。而這其中煩的是污染、怕的是掉包。因?yàn)楸M管研究僧們有方法把一切污染的源頭扼殺在搖籃之內(nèi)，卻沒(méi)有火眼金睛辨別已經(jīng)換了馬甲的錯(cuò)誤細(xì)胞。因而細(xì)胞一旦被李代桃僵，再資深的科研者都會(huì)陰溝里翻船，所以細(xì)胞鑒定顯得尤為重要。為什么要進(jìn)行細(xì)胞系鑒定？進(jìn)行細(xì)胞系STR鑒定是很重要的。...

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使用ipsc誘導(dǎo)多能干細(xì)胞生成類(lèi)器官技術(shù)簡(jiǎn)介

類(lèi)器官是復(fù)雜的3-D器官樣微組織，由多種分化的細(xì)胞類(lèi)型組成，其結(jié)構(gòu)組織類(lèi)似于體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞，具有中央腔和其他類(lèi)似體內(nèi)的結(jié)構(gòu)特征。從ipsc誘導(dǎo)多能干細(xì)胞產(chǎn)生的類(lèi)器官已被描述用于胃、腸、肺、大腦、腎、肝臟等各種組織，這些類(lèi)器官是其他體外模型的有吸引力的替代品；這些微組織比2-D細(xì)胞培養(yǎng)或簡(jiǎn)單的3-D球體聚集體更好地概括了體內(nèi)組織表型，但沒(méi)有與器官外植體或組織切片相關(guān)的挑戰(zhàn)，例如培養(yǎng)壽命有限。事實(shí)上，類(lèi)器官保留了許多細(xì)胞培養(yǎng)的典型有利特征，例如維持穩(wěn)定培養(yǎng)數(shù)月的能力，以及冷凍保存...

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單層細(xì)胞系傳代培養(yǎng)指南

大多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞培養(yǎng)物生長(zhǎng)為單一厚度的細(xì)胞層（單層）或附著在玻璃或經(jīng)過(guò)特殊處理的塑料基質(zhì)上的薄片。為了保持培養(yǎng)物的健康和積極生長(zhǎng)，通常需要定期對(duì)它們進(jìn)行傳代培養(yǎng)。常見(jiàn)的傳代培養(yǎng)方法涉及通過(guò)使用蛋白水解酶（如胰蛋白酶或膠原酶）破壞細(xì)胞間和細(xì)胞與基質(zhì)的連接。在細(xì)胞解離成主要由單細(xì)胞組成的懸浮液后，將它們稀釋并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)容器中。在那里它們可以重新附著并開(kāi)始生長(zhǎng)和分裂，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的孵化后再次接近匯合。此時(shí)，它們可以再次進(jìn)行傳代培養(yǎng)或用于實(shí)驗(yàn)。以下指南描述了典型單層細(xì)胞培養(yǎng)...

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hTERT-成纖維細(xì)胞培養(yǎng)解決方案

hTERT成纖維細(xì)胞為永生化子宮內(nèi)膜成纖維細(xì)胞(THESC)具有延長(zhǎng)的壽命，并且在核型、形態(tài)和表型方面與原代親代細(xì)胞相似。在功能上，THESCs顯示激素治療后蛻膜化的生化終點(diǎn)。THESCs來(lái)源于從患有肌瘤的成年女性身上獲得的基質(zhì)細(xì)胞。原代基質(zhì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞通過(guò)用來(lái)自包裝細(xì)胞系pA317-hTERT的上清液感染而永生化，該細(xì)胞系表達(dá)hTERT和嘌呤霉素抗性基因。hTERT成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方案如下：一、所需材料Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM)/F12(Sigma,D2...

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CRISPR-Cas9基因編輯實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)

在細(xì)胞上做基因研究的一般的過(guò)程就是：利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout)，獲得基因敲除細(xì)胞系純合細(xì)胞：然后分析相關(guān)的生物學(xué)表型；最后做為對(duì)照還需要將原敲除的基因回補(bǔ)會(huì)到原細(xì)胞系中，做為對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比。而利用Cas9進(jìn)行細(xì)胞敲除之后，細(xì)胞回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)室要注意哪些問(wèn)題?特別需要考慮的技術(shù)原理是那些？如何規(guī)劃好實(shí)驗(yàn)流程，下面我們就一步步的進(jìn)一下細(xì)胞其因敲除和回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)的效率/價(jià)格/周期等。一、敲除細(xì)胞的方式一般都是純合基因敲除細(xì)胞，當(dāng)然也可以選擇MixC...

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