細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌屋凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征2、學(xué)會(huì)用熒光探針對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記來(lái)檢測(cè)正?；罴?xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個(gè)體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過(guò)程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上可見(jiàn)凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)...

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科研實(shí)驗(yàn)常用人肝癌細(xì)胞株的區(qū)別

肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是近年來(lái)發(fā)病率急劇上升的惡性腫瘤之一。肝癌細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于各類肝癌的研究。肝癌細(xì)胞系的基因組與健康人細(xì)胞系的基因組不同。常見(jiàn)的人肝癌細(xì)胞系有PLC、Huh7、Huh7.5、Hep3B、HepG2、SMMC-7721、MHCC97-H、MHCC9-L等，每一種細(xì)胞系都有自己的特點(diǎn)，但是，SMMC-7721,、MHCC9-L已經(jīng)退出實(shí)驗(yàn)舞臺(tái)，由于它們具有與原代肝癌細(xì)胞相似的生物學(xué)特性，無(wú)生物學(xué)改變、特性穩(wěn)定、無(wú)限制...

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慢病毒包裝常見(jiàn)問(wèn)題匯總

Q:什么是MOI？A:在微生物學(xué)中，MOI是病原體(如噬菌體或病毒、細(xì)菌等)與感染目標(biāo)(如細(xì)胞)的比率。對(duì)于病毒，MOI是病毒顆粒數(shù)量與特定空間中存在的目標(biāo)細(xì)胞數(shù)量的比率。通?？蓪⒛持昙?xì)胞有80%被感染時(shí)所用的病毒顆粒數(shù)和細(xì)胞數(shù)目的比值作為該株細(xì)胞的MOI。Q：如何稀釋病毒？A：您可使用完培、PBS液等將病毒稀釋到需要的滴度。如將滴度為5x109TU/ml的病毒稀釋到1x109TU/ml，則需取20µl病毒液加入到80µl的完培中。Q：用于病毒感染的細(xì)...

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慢病毒包裝步驟

1.重組慢病毒的制備Day1:匯合度90%的10cmdishsHEK293T細(xì)胞（~6×107/dish）按1：1比例傳代至15cmdishs，第二天細(xì)胞匯合度達(dá)到90%-95%（~1.5×108/dish），培養(yǎng)基為Gibico高糖DMEM培養(yǎng)基（含10%FBS）。Day2:轉(zhuǎn)染前2-3個(gè)小時(shí)更換培養(yǎng)基（含10%FBS)；2)按照以下比例配制轉(zhuǎn)染試劑：Mix1體積μlMix2量DMEM（無(wú)FBS）1000μlDMEM（無(wú)FBS）1000μl目的基因質(zhì)粒25μgVGF190μ...

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病毒實(shí)驗(yàn)原理和慢病毒包裝系統(tǒng)介紹

慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細(xì)胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒實(shí)驗(yàn)原理慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。但區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。重組慢病毒載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的工具載體，...

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