DNA克隆技術(shù)概述

當(dāng)您聽到“克隆”一詞時(shí)，您可能會(huì)想到克隆整個(gè)生物體，例如綿羊多利。然而，克隆某物的全部意思就是制作它的基因精確副本。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，常被克隆的是基因或其他小片段DNA稱為DNA克隆。DNA克隆技術(shù)概述DNA克隆技術(shù)其實(shí)就是基因編輯，是指制作特定DNA片段的多個(gè)相同副本的過程。在典型的DNA克隆過程中，通常會(huì)將目的的基因或其他DNA片段插入稱為質(zhì)粒的環(huán)狀DNA片段中。插入是使用“剪切和粘貼”DNA的酶完成的，它會(huì)產(chǎn)生一個(gè)重組DNA分子，或由多個(gè)來源的片段組裝而成的DNA。...

查看更多

實(shí)驗(yàn)室儀器可以自校準(zhǔn)嗎？

實(shí)驗(yàn)室移液槍、實(shí)驗(yàn)室天平、PH計(jì)等實(shí)驗(yàn)室儀器使用一段時(shí)間后，需要對(duì)其進(jìn)行校準(zhǔn)，那么實(shí)驗(yàn)室儀器可以自校準(zhǔn)嗎？小編帶你了解一下：內(nèi)部校準(zhǔn)與自校準(zhǔn)的區(qū)別“自校準(zhǔn)”一般是利用測量設(shè)備自帶的校準(zhǔn)程序或功能（比如智能儀器的開機(jī)自校準(zhǔn)程序）或設(shè)備廠商提供的沒有溯源證書的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行的校準(zhǔn)活動(dòng)，通常情況下，其不是有效的量值溯源活動(dòng)，但特殊領(lǐng)域另有規(guī)定除外。“內(nèi)部校準(zhǔn)”是指在實(shí)驗(yàn)室或其所在組織內(nèi)部實(shí)施的，使用自有的設(shè)施和測量標(biāo)準(zhǔn)，校準(zhǔn)結(jié)果僅用于內(nèi)部需要，為實(shí)現(xiàn)獲認(rèn)可的檢測活動(dòng)相關(guān)的測量設(shè)備的量...

查看更多

DNA重組實(shí)驗(yàn)技術(shù)總結(jié)

DNA重組技術(shù)，是分子的生物學(xué)研究生需要掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一，DNA重組實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)如下：一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康捏w外連接獲得重組分子，用于轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞。二、實(shí)驗(yàn)原理DNA重組技術(shù)是用內(nèi)切酶分別將載體和外源DNA切開，經(jīng)分離純化后，用連接酶將其連接，構(gòu)成新的DNA分子。外源DNA片段和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)策略有以下幾種：1、帶有非互補(bǔ)突出端的片段用兩種不同的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化可以產(chǎn)生帶有非互補(bǔ)的粘性末端，這也是最容易克隆的DNA片段，一般情況下，常用質(zhì)粒載體均帶有多個(gè)不同限制酶的識(shí)別序列組...

查看更多

PCR儀使用參數(shù)設(shè)定注意事項(xiàng)

PCR儀使用參數(shù)設(shè)定注意事項(xiàng)PCR儀使用參數(shù)設(shè)定不正確會(huì)影響到PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這主要表現(xiàn)在溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)上，如果溫度參數(shù)設(shè)置過高，延伸時(shí)間不夠都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，下面談?wù)勈褂肞CR儀參數(shù)設(shè)定時(shí)的注意事項(xiàng)：一、溫度和時(shí)間溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模...

查看更多

一種通過改造CHO 細(xì)胞提升抗體產(chǎn)量的新技術(shù)

丙酮酸羧化酶是細(xì)胞質(zhì)和線粒體代謝途徑的重要元素，可以有效促進(jìn)能量代謝。在CHO細(xì)胞中過表達(dá)酵母胞質(zhì)丙酮酸羧化酶(PYC2)，可以增加丙酮酸流向TCA循環(huán)。增強(qiáng)的PYC2表達(dá)導(dǎo)致丙酮酸通量增加，從而使乳酸積累減少多達(dá)4倍，并顯著增加細(xì)胞密度和培養(yǎng)壽命。有了這個(gè)結(jié)果，與親本細(xì)胞相比，工程細(xì)胞的抗體表達(dá)顯著提高了70%，產(chǎn)品質(zhì)量也有所提高（約3倍）。通過PYC2工程改造提升細(xì)胞性能，在丙酮酸、葡萄糖、乳酸和細(xì)胞能量代謝方面具有均高于親代細(xì)胞的各種優(yōu)勢。PYC2工程改造原理和方法在補(bǔ)...

查看更多